Како одредити оптималну концентрацију?
За индуктор ИПТГ (изопропил-бета-д-тиогалактозид), што је већа концентрација, то боље.Оптимална концентрација зависи од специфичних експерименталних услова и жељеног индукционог ефекта.
Генерално, концентрација ИПТГ се користи у опсегу од 0,1-1 мМ.Ниже концентрације могу смањити нежељене ефекте на раст ћелија и могу смањити цитотоксичност због прекомерне експресије циљних протеина.Веће концентрације могу изазвати прекомерно метаболичко оптерећење ћелије, утичући на раст ћелија и ефикасност експресије.
Начин да се одреди оптимална концентрација може бити да се процени ниво експресије циљног протеина спровођењем ИПТГ индукционих тестова при различитим концентрацијама.Тестови културе мањег обима се могу извести коришћењем опсега ИПТГ концентрација (нпр. 0,1 мМ, 0,5 мМ, 1 мМ, итд.), а ефекат експресије при различитим концентрацијама може се проценити детекцијом нивоа експресије циљног протеина (нпр. Вестерн блот или детекција флуоресценције).Према експерименталним резултатима, као оптимална концентрација изабрана је концентрација са најбољим ефектом експресије.
Поред тога, можете се обратити и релевантној литератури или искуству других лабораторија да бисте разумели уобичајени опсег концентрације ИПТГ-а у сличним експерименталним условима, а затим оптимизовали и прилагодили у складу са експерименталним потребама.
Важно је напоменути да оптимална концентрација може да варира у зависности од различитих експресионих система, циљних протеина и експерименталних услова, тако да је најбоље оптимизовати од случаја до случаја.
Време поста: 28.09.2023