4-Нитрофенил бета-D-галактопиранозид CAS:200422-18-0

Ефекат: ONPG је супстрат који се посебно користи за детекцију присуства и активности ензима β-галактозидазе. Када је ензим β-галактозидазе присутан и активан, он разлаже ONPG на два производа: о-нитрофенол и дериват галактозе. Ослобађање о-нитрофенола доводи до промене жуте боје, што се може мерити спектрофотометром.

Примена: ONPG има неколико примена у истраживањима молекуларне биологије и биохемије:

Одређивање активности β-галактозидазе: ONPG се обично користи за мерење и квантификацију активности ензима β-галактозидазе. Брзина формирања o-нитрофенола, која је директно пропорционална активности ензима, може се мерити спектрофотометријски.

Експресија и регулација гена: ONPG се често користи у експериментима везаним за студије експресије и регулације гена. Често се користи у тестовима фузионих протеина, као што је уобичајено коришћени lacZ фузиони систем, за проучавање експресије гена под контролом специфичних промотора. Активност бета-галактозидазе мерена помоћу ONPG пружа увид у ниво експресије гена.

Скрининг за β-галактозидазну активност: ONPG се може користити као колориметријска метода скрининга у технологији рекомбинантне ДНК за идентификацију присуства и функционалности LacZ гена, који кодира β-галактозидазу. Ова метода скрининга помаже у идентификацији клонова који садрже ген од интереса.

Студије кинетике ензима: ONPG је такође користан у проучавању кинетике ензима β-галактозидазе. Мерењем брзине реакције ензим-супстрат при различитим концентрацијама супстрата, могуће је одредити кинетичке параметре као што су Михаелис-Ментенове константе (Km) и максималне брзине реакције (Vmax).