Дитиотреитол (ДТТ) је уобичајено коришћено редукционо средство, познато и као нови зелени адитив.То је мало молекуларно органско једињење са две меркаптанске групе (-СХ).Због својих редукционих својстава и стабилности, ДТТ се широко користи у експериментима биохемије и молекуларне биологије.
Главна улога ДТТ-а је да смањи дисулфидне везе у протеинима и другим биомолекулима.Дисулфидна веза је важан део савијања и стабилности протеина, али под одређеним експерименталним условима, као што су редуцибилна СДС-ПАГЕ анализа, рекомбинација протеина и савијање, неопходно је редуцирати дисулфидну везу на две тиол групе да би се открила просторна структура протеина. протеина.ДТТ може да реагује са дисулфидним везама да их редукује на меркаптан групе, отварајући тако просторну структуру протеина и олакшавајући анализу и манипулацију.
ДТТ се такође може користити за заштиту активности и стабилности ензима.У неким реакцијама катализованим ензимима, активност ензима може бити смањена оксидантом.ДТТ може да реагује са оксидантима да их редукује у безопасне супстанце, чиме штити активност и стабилност ензима.
У поређењу са традиционалним редукционим агенсима као што је β-меркаптоетанол (β-МЕ), ДТТ се сматра сигурнијим и стабилнијим редукционим агенсом.Не само да је стабилан у воденом раствору, већ и одржава своја редукциона својства под високим температурама и кисело-базним условима.
Употреба ДТТ-а је релативно једноставна.Генерално, ДТТ се раствара у одговарајућем пуферу и затим додаје у експериментални систем.Оптимална концентрација ДТТ-а се мора одредити у складу са специфичним експериментом и обично се користи у опсегу од 0,1-1 мМ.Ниже концентрације могу смањити нежељене ефекте на раст ћелија и могу смањити цитотоксичност због прекомерне експресије циљних протеина.Веће концентрације могу изазвати прекомерно метаболичко оптерећење ћелије, утичући на раст ћелија и ефикасност експресије.
Начин да се одреди оптимална концентрација може бити да се процени ниво експресије циљног протеина спровођењем ИПТГ индукционих тестова при различитим концентрацијама.Тестови културе мањег обима се могу извести коришћењем опсега ИПТГ концентрација (нпр. 0,1 мМ, 0,5 мМ, 1 мМ, итд.), а ефекат експресије при различитим концентрацијама може се проценити детекцијом нивоа експресије циљног протеина (нпр. Вестерн блот или детекција флуоресценције).Према експерименталним резултатима, као оптимална концентрација изабрана је концентрација са најбољим ефектом експресије.
Поред тога, можете се обратити и релевантној литератури или искуству других лабораторија да бисте разумели уобичајени опсег концентрације ИПТГ-а у сличним експерименталним условима, а затим оптимизовали и прилагодили у складу са експерименталним потребама.
Важно је напоменути да оптимална концентрација може да варира у зависности од различитих експресионих система, циљних протеина и експерименталних услова, тако да је најбоље оптимизовати од случаја до случаја.
Укратко, ДТТ је уобичајено коришћен редукциони агенс који се може користити за смањење дисулфидних веза у протеинима и другим биомолекулима и за заштиту активности и стабилности ензима.Широко се користи у експериментима биохемије и молекуларне биологије.
Време поста: 28.09.2023