Око нас има много неопеваних хероја, који изгледају обични, а заправо нам прећутно много доприносе.Протеиназа К је „неопевани херој“ у индустрији молекуларне дијагностике, иако је у поређењу са „великим и моћним“ у индустрији, протеиназа К толико скромна да смо дуго превидели њен значај.Са избијањем нове крунске епидемије, потражња за протеиназом К је нагло порасла, а понуда у земљи и иностранству је далеко иза потрошње и сви су одједном схватили да је протеиназа К толико важна.
Која је употреба протеиназе К?
Протеиназа К је серинска протеаза са активношћу протеолитичког ензима и може да одржава активност у широком опсегу окружења (пХ (4-12,5), пуфер са високим садржајем соли, висока температура од 70°Ц, итд.).Поред тога, активност протеиназе К не инхибира СДС, уреа, ЕДТА, гванидин хидрохлорид, гванидин изотиоцијанат итд., а одређена количина детерџента такође може да појача активност протеиназе К. У медицинском лечењу (дезинфекција вирусима и микробима ), храна (омекшавање меса), кожа (омекшавање длаке), производња вина (бистрење алкохола), припрема аминокиселина (деградирано перје), екстракција нуклеинске киселине, ин ситу хибридизација, итд., протеиназа К Постоје примене.Најчешће коришћена примена је екстракција нуклеинске киселине.
Протеиназа К може ензимизирати све врсте протеина у узорку, укључујући оне хистоне који су чврсто везани за нуклеинске киселине, тако да се нуклеинске киселине могу ослободити из узорка и отпустити у екстракт, олакшавајући следећи корак екстракције и пречишћавања.У детекцији вирусне нуклеинске киселине, протеиназа К је једна од важних компоненти у раствору за узорковање вируса.Протеиназа К може да пукне и инактивира протеин омотача вируса, што је сигурније током фазе транспорта и детекције;поред тога, протеиназа К такође може да разгради РНКазу, спречава разградњу вирусне РНК и олакшава детекцију нуклеинске киселине.
Слава протеиназе К преко ноћи
Било у области научних истраживања или у области ИВД, екстракција нуклеинске киселине је најосновнији експеримент, тако да је протеиназа К одувек била веома важна егзистенција.Међутим, у прошлости је протеиназа К била далеко мање позната од њене улоге.Велики део овога је био зато што је однос понуде и потражње протеиназе К био веома стабилан.Мало људи би помислило да би снабдевање протеиназом К представљало проблем.
Са избијањем нове епидемије круне, потражња за тестирањем нуклеинске киселине је порасла.До краја јуна 2020. Кина је завршила скоро 90 милиона нових тестова круна, а овај број је још алармантнији на глобалном нивоу.У експериментима екстракције нуклеинске киселине, радна концентрација протеиназе К је око 50-200 μг/мЛ.Генерално, потребно је око 100 μг протеиназе К за екстракцију узорка нуклеинске киселине.У стварној употреби, да би се повећала ефикасност екстракције нуклеинске киселине, често ће се Протеиназа К користити у повећаној количини.Детекција нуклеинске киселине новог коронавируса донела је велику потражњу за протеиназом К.Првобитни баланс понуде и потражње протеиназе К је брзо нарушен, а протеиназа К је преко ноћи постала важан материјал за превенцију епидемије.
Потешкоће у производњи протеиназе К
Иако је са развојем епидемије значајна вредност протеиназе К цењена од стране људи, срамотно је да се због претераног ниског кључа протеиназе К мало домаћих компанија укључило у производњу протеиназе К. желе да успоставе производњу протеиназе К Током процеса производње откривено је да је протеиназа К изузетно посебан протеин.Изузетно је изазовно проширити капацитет производње протеиназе К у кратком временском периоду.
Производња протеиназе К у великим размерама суочава се са следећим потешкоћама
1. Ниска експресија
Протеиназа К може неспецифично разградити већину протеина и изазвати озбиљну токсичност експресионој ћелији домаћину.Стога је ниво експресије протеиназе К генерално веома низак.Скрининг експресионих система и сојева који високо експримирају протеиназу К генерално захтева дужи циклус.
2. Остаци пигмената и нуклеинских киселина
Ферментација великих размера уводи велику количину пигмента и остатака нуклеинске киселине домаћина.Тешко је уклонити ове нечистоће једноставним процесом пречишћавања, а сложено пречишћавање повећава трошкове и смањује стопу опоравка.
3. Нестабилност
Протеиназа К није довољно стабилна, може сама да се ензимизира и тешко ју је стабилно чувати на 37°Ц дуже време без заштитног средства.
4. Лако се таложи
Приликом припреме лиофилизираног праха протеиназе К, како би се осигурало да је чврсти садржај протеиназе К у лиофилизираном праху велики, потребно је додати лиофилизирано заштитно средство у високој концентрацији, али када се концентрација протеиназе К достиже 20 мг/мЛ и више, лако је Агрегација формира талог, што отежава сушење замрзавањем протеиназе К са високим садржајем чврсте материје.
5. Велика инвестиција
Протеиназа К има јаку активност протеазе и може хидролизовати друге протеазе у лабораторији.Према томе, протеиназа К захтева специјализоване производне области, опрему и особље за истраживање и развој и производњу.
КСД БИОЦХЕМ-ов раствор протеиназе К
КСД БИОЦХЕМ има зрелу платформу за експресију и пречишћавање протеина, и има богато искуство у експресији и пречишћавању рекомбинантних протеина и оптимизацији производних процеса.Кроз брзо формирање истраживачког и развојног тима, превазиђен је процес производње протеиназе К великих размера.Месечна производња лиофилизованог праха је више од 30 кг.Производ има стабилне перформансе, високу ензимску специфичну активност и нема остатака цитокрома домаћина и нуклеинске киселине.Добродошли да контактирате КСД БИОЦХЕМ Набавите пробни пакет (Е-маил:sales@xdbiochem.comТел: +86 513 81163739).
Техничка решења КСД БИОЦХЕМ укључују
Користећи интеграцију плазмида са више копија, одабрани су сојеви високе експресије са нивоом експресије од 8г/Л, чиме се превазилази проблем ниског нивоа експресије протеиназе К.
Успостављањем вишестепеног процеса пречишћавања, остаци цитокрома домаћина и нуклеинске киселине протеиназе К успешно су уклоњени испод стандардне вредности.
Кроз скрининг високе пропусности формулација заштитних пуфера, изабран је пуфер који може стабилно да складишти протеиназу К на 37°Ц.
Пуфери за скрининг превазилазе проблем да се протеиназа К лако агрегира и таложи при високим концентрацијама, и поставља основу за високо чврсти садржај протеиназе К за сушење замрзавањем.
КСД БИОЦХЕМ узорак протеиназе К
КСД БИОЦХЕМ тест стабилности протеиназе К: неће бити значајне промене активности након 80 дана на собној температури
КСД БИОЦХЕМ тест стабилности протеиназе К: неће бити значајне промене активности након 80 дана на собној температури.
Поређење ефекта екстракције нуклеинске киселине КСД БИОЦХЕМ протеиназе К и конкурентских производа.У процесу екстракције нуклеинске киселине користе се КСД БИОЦХЕМ и компетитивна протеиназа К.Ефикасност екстракције КСД БИОЦХЕМ протеиназе К је већа, а вредност Цт циљног гена је нижа.
Време поста: 31.12.2021