4-нитрофенил бета-Д-галактопиранозид ЦАС:200422-18-0

Ефекат: ОНПГ је супстрат који се посебно користи за откривање присуства и активности ензима β-галактозидазе.Када је ензим β-галактозидаза присутан и активан, он цепа ОНПГ на два производа: о-нитрофенол и дериват галактозе.Ослобађање о-нитрофенола доводи до промене жуте боје, што се може мерити спектрофотометром.

Примена: ОНПГ има неколико примена у истраживању молекуларне биологије и биохемије:

Одређивање активности β-галактозидазе: ОНПГ се обично користи за мерење и квантификацију активности ензима β-галактозидазе.Брзина формирања о-нитрофенола, која је директно пропорционална активности ензима, може се мерити спектрофотометријски.

Експресија и регулација гена: ОНПГ се често користи у експериментима везаним за експресију гена и студије регулације.Често се користи у тестовима фузионих протеина, као што је уобичајено коришћени лацЗ фузиони систем, за проучавање експресије гена под контролом специфичних промотера.Активност бета-галактозидазе мерена коришћењем ОНПГ-а пружа увид у ниво експресије гена.

Скрининг активности β-галактозидазе: ОНПГ се може користити као колориметријска метода скрининга у технологији рекомбинантне ДНК да би се идентификовало присуство и функционалност ЛацЗ гена, који кодира β-галактозидазу.Ова метода скрининга помаже у идентификацији клонова који садрже ген од интереса.

Студије кинетике ензима: ОНПГ је такође користан у проучавању кинетике ензима β-галактозидазе.Мерењем брзине реакције ензим-супстрат при различитим концентрацијама супстрата, могуће је одредити кинетичке параметре као што су Мицхаелис-Ментен константе (Км) и максималне брзине реакције (Вмак).